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磷酸化修饰

磷酸化修饰

磷酸化作用-多肽修饰

  磷酸化影响着细胞生命的方方面面。蛋白激酶通过调节信号通路和细胞进程,影响胞内通信功能的每一方面。然而异常的磷酸化也是引起诸多疾病的起因。尤其是突变的蛋白激酶、磷酸酶可导致许多紊乱。很多天然毒素和病原体也是通过改变胞内蛋白的磷酸化状态来发挥它们的影响。


  丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)的磷酸化作用是一个可逆的蛋白修饰过程,它们参与调节无数的细胞活动,如受体信号转导、蛋白质缔合与分割、激活或抑制蛋白功能,甚至细胞的存活等。磷酸盐是带负电的(每一个磷酸基携带两个负电荷)。因此,他们的加入会改变蛋白属性,这种变化通常是构象变化,引起蛋白质改变它的构造方式。当磷酸基团被去除时,蛋白质构象又会恢复至原始状态。如果这两种构象的蛋白质表现出不同的活性,那磷酸化可以作为此蛋白控制其活性的分子开关。

  许多激素均是通过提高丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)残基的磷酸化状态来调节特异性酶的活性。生长因子(如胰岛素)可以触发酪氨酸(Tyr)的磷酸化作用。这些氨基酸的磷酸基团是可以迅速地被去掉的,因此,Ser、Thr和Tyr的功能在调控细胞活动的过程(如肿瘤扩散)中起到分子开关的作用。

   合成肽在研究蛋白激酶底物以及相互作用的领域起着非常有用的作用。但目前一些因素阻碍或限制了磷酸化多肽合成技术的适应性,如无法实现固相合成全自动化、缺乏与标准分析平台之间的便利连接等。合生生工基于PeptideSynTM 平台的多肽合成及磷酸化修饰技术克服了这些限制,同时提高了的合成效率也显示了它的可扩展性。PeptideSynTM 平台非常适合于蛋白激酶底物、抗原、结合分子和抑制剂的研究。

 

采用高品质的Fmoc-Thr(HPO3Bzl)-OH, Fmoc-Tyr(HPO3Bzl)-OH, Fmoc-Ser(HPO3Bzl)-OH 等原料,采用Fmoc固相合成工艺,合成Thr,Tyr,Ser磷酸化多肽,使用HPLC 对产物进行纯化。最终产品提供相应的质谱图,纯度分析的HPLC 色谱图,及COA。

L型磷酸化修饰  

Thr(HPO3)

Tyr(HPO3)

Ser(HPO3)

       pT

pY      

 pS

苏氨酸磷酸化

酪氨酸磷酸化

  丝氨酸磷酸化

D型磷酸化修饰 

D-Thr(HPO3)

D-Tyr(HPO3)

D-Ser(HPO3) 

p(D-T)

p(D-Y)  

p(D-S)

苏氨酸磷酸化

酪氨酸磷酸化

  丝氨酸磷酸化

双磷酸化修饰

一个序列中有两个Thr,Tyr,Ser 位点进行磷酸化修饰

多磷酸化修饰

一个序列中有两个Thr,Tyr,Ser 位点进行磷酸化修饰

我们提供pSer、pTyr、pThr和D-pSer、D-pTyr、D-pThr的磷酸化修饰服务。

可同时进行2个位点、3个位点、4个位点、5个位点的磷酸化修饰。

磷酸化多肽合成案例(Thr(HPO3)、Tyr(HPO3)、Ser(HPO3) 等)

序列中有4个磷酸化位点(xxxpSpTxxxpSxxxpTx),纯度为95%,完成周期为3周。

HPLC分析:

磷酸化修饰(图1)

MS图谱:

磷酸化修饰(图2)


 


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