最古老的缩合方法就是酰基叠氮物法，在1902年酰基叠氮物法就已经被TheodorCurtius引入了多肽化学中。除了与酰基叠氨缩合的游离氨基酸和多肽，在碱性水溶液中，氨基酸酯能在有机溶剂中使用。对腙酸进行捕获来说，与其他的缩合方法不同的就是它不需要增加另一等当量的氨基组分和辅助碱。

有一段时间，随着引入了可选择性裂解的氨基酸保护基，该方法得到了大规模的复兴，导致人们一直以为叠氮物法是唯一不发生消旋的缩合方法。该方法的起始原料是晶体状的氨基酸酰肼或肽酰肼64。叠氮化物65是在－10℃的盐酸中利用等当量的亚硝酸钠亚硝化酰肼而成，经过洗涤、干燥，之后和相应的氨基组分反应。也可以使用二苯磷酰基叠氮化物（DPPA）来合成酰基叠氮化物。由于酰基叠氮化物的热不稳定，叠氮缩合反应应该在低温下进行。如果温度较高，会产生副反应，最终导致副产物脲生成。

因为N端保护的肽链比较长，肼解酯基通常会很难，所以选择使用正交的N保护肼衍生物。在完成选择性脱除肼基以后，叠氮缩合可以使用根据倒接策略组合的多肽片段。

尽管叠氮法是人们一直认为消旋化倾向最小的缩合方法。但是在反应中，如果碱的量偏多的话，则会有相当大的消旋被诱发出来。所以，在缩合反应期间应当尽量避免和碱接触。比如三乙胺由N，N－二异丙胺或N－烷基吗啉来代替中和。对于片段缩合来说，该方法尽管有一定的局限性，但依然是非常重要的方法。此方法异构化倾向比较低，对于羟基未保护丝氨酸或苏氨酸组分非常适用，同时Nˊ保护的本行酰肼的用途也多种多样。